Tag Archives: миометрий
Кинетика ингибиторного действия каликс[4]арена С-90 на активность транспортной Ca(2+),Mg(2+)-АТРазы плазматической мембраны гладкомышечных клеток
Т. А. Веклич1, А. А. Шкрабак1, Ю. Ю. Мазур1,
Р. В. Родик2, В. И. Кальченко2, С. А. Костерин1
1Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
2Институт органической химии НАН Украины, Киев;
e-mail: kinet@biochem.kiev.ua; vik@ioch.kiev.ua
В экспериментах, выполненных на суспензии плазматических мембран клеток миометрия, обработанных 0,1%-ым раствором дигитонина, исследовали кинетические закономерности ингибирующего действия каликс[4]арена С-90 (5,11,17,23-тетра(трифтор)метил(фенилсульфонилимино)метиламино-25,26,27,28-тетрапропоксикаликс[4]арен) на Са2+,Mg2+-АТРазную активность. Проверяли сродство указанного энзима к АТР, ионам Mg и Са в зависимости от концентрации каликсарена С-90, а также его влияние на кооперативный эффект и на максимальную скорость гидролиза АТР. Показано, что на сродство Са2+,Mg2+-АТРазы к АТР каликсарен С-90 практически не влияет, что свидетельствует об отсутствии конкуренции между центрами связывания АТР и С-90. Также отмечено отсутствие влияния на сродство и кооперативный эффект ионов Са при применении каликсарена С-90 в концентрациях до 50 мкМ. Под влиянием каликс[4]арена С-90 наблюдается незначительное увеличение коэффициента активации Са2+,Mg2+-АТРазы хлоридом магния. Во всех трех случаях наблюдалось существенное уменьшение максимальной скорости гидролиза АТР, что в сочетании с отсутствием влияния на константу сродства свидетельствует о неконкурентном механизме ингибирования каликсареном С-90 Са2+,Mg2+-АТРазной активности.
Активация чувствительного к глибенкламиду набухания митохондрий миометрия крыс в условиях индукции циклоспорин А-чувствительной митохондриальной поры
О. Б. Вадзюк, С. А. Костерин
Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
e-mail: olga_vadzyuk@hotmail.com
Показано, что ионы Са индуцируют набухание митохондрий миометрия крыс и активируют процессы окисления, сопровождающиеся повышенным образованием активных форм кислорода. Эти эффекты подавляются в присутствии блокатора митохондриального Са2+-унипортера рутениевого красного и блокатора митохондриальной поры циклоспорина А, что свидетельствует об активации ионами Са митохондриальной поры переходной проницаемости в митохондриях миометрия. Индуцированное 100 мкМ СаCl2 набухание митохондрий уменьшалось в присутствии блокатора АТР-чувствительных K+-каналов глибенкламида (10 мкМ) в среде, содержащей ионы K и не изменялось под действием глибенкламида в безкалиевой среде. Са2+-индуцированное набухание митохондрий устранялось скавенджерами активных форм кислорода N-ацетилцистеином и аскорбатом в среде, содержащей ионы K и не зависило от этих веществ в безкалиевой среде. Таким образом, можно предположить, что при индукции ионами Са митохондриальной поры переходной проницаемости происходит активация АТР-чувствительных K+-каналов в митохондриях миометрия, которая опосредуется активными формами кислорода.
Cа(2+)/Н(+)-обмен в митохондриях миометрия
О. В. Коломиец, Ю. В. Данилович, А. В. Данилович, С. А. Костерин
Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
e-mail: danylovych@biochem.kiev.ua
С использованием флуоресцентного зонда Fluo-4 АМ идентифицирован Na+-независимый Са2+/Н+-обмен в изолированных митохондриях миометрия крыс и изучены его отдельные свойства. Искусственное создание направленного в матрикс митохондрий градиента протонов вызывает антипортное высвобождение Са2+, предварительно аккумулированного в энергонезависимом процессе (в присутствии Mg-АТР и сукцината). Функционирование Са2+/Н+-обмена зависит от величины градиента протонов и характеризуется обратимостью, а именно: в условиях защелачивания внемитохондриальной среды регистрируется дополнительная аккумуляция Са2+ органеллами. Градиенты моновалентных катионов (Na+, K+, Li+) не вызывают высвобождение Са2+ из митохондрий. Скорость Са2+/Н+-обмена возрастает в условиях увеличения ΔрН на мембране митохондрий, а кинетика ΔрН-индуцированного высвобождения Са2+ из матрикса удовлетворяет закономерностям реакции первого порядка. Исследование свойств Са2+/Н+-обмена в митохондриях миометрия показало, что этот транспортный процесс имеет электрогенную природу, осуществляется, возможно, в стехиометрии 1 : 1 (коэффициент Хилла по Н+ близок к 1), а также способен регулировать концентрацию Са2+ в матриксе при физиологических условиях (активация при рН ≈ 6,9) . Таким образом, во внутренней мембране митохондрий миометрия существует система вторично-активного транспорта Са2+ из матрикса этих органелл в миоплазму, причем в основе этого процесса, возможно, лежит функционирование Са2+/Н+-обменник.
Исследование влияния нитрозактивних соединений на поляризацию внутренней мембраны митохондрий в миоцитах матки крыс с использованием потенциалчувствительного флуоресцентного зонда DіОС(6)(3)
Ю. В. Данилович, А. В. Данилович, О. В. Коломиец, С. А. Костерин, С. А. Карахим, А. Ю. Чунихин
Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
e-mail: danylovych@biochem.kiev.ua
Исследовано влияние нитрозактивних соединений (нитропруссида и нитрита натрия) на уровень поляризации внутренней митохондриальной мембраны миоцитов матки с использованием метода лазерной конфокальной микроскопии и потенциалчувствительного флуоресцентного зонда DiOC6(3) (3,3′-дигексилоксакарбоцианина). Продемонстрирована колокализация специфических для мембран митохондрий флуоресцентных зондов (MitoTracker Orange CM-H2TMRos, 10 – nonyl acridine orange и DiOC6(3)). Показано, что нитропруссид натрия в концентрации 0,1 мМ вызывает умеренное снижение трансмембранного потенциала митохондрий. Это наблюдение подтверждается методом проточной цитофлуориметрии. Эффективность действия нитрита натрия в аналогичной концентрации существенно ниже, чем нитропруссида натрия. Показано, что нитропруссид натрия, но не нитрит, вызывает незначительное набухание митохондрий. Обсуждается возможная протекторная роль оксида азота по отношению к митохондриям.