Tag Archives: проточная цитометрия
Динамика тромбининдуцированного экспонирования актина на поверхности тромбоцитов
А. А. Тихомиров
Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
e-mail: artem_tykhomyrov@ukr.net
Тромбоциты играют ключевую роль в процессах тромбообразования, а также вовлекаются в регуляцию ангиогенеза, иммунного ответа и репаративных процессов. Во время своего функционирования тромбоциты претерпевают сложные изменения, при этом субклеточные структуры, которые не обнаруживаются в состоянии физиологического покоя, экспонируются на поверхность тромбоцитов после их активации агонистами. Целью данного исследования было оценить динамические характеристики экспонирования актина на поверхности плазматической мембраны тромбинактивированных тромбоцитов. С помощью проточной цитофлуориметрии было показано, что уровень актина, представленный активированными тромбоцитами, напрямую зависит от концентрации агониста. В частности, стимулирование тромбоцитов тромбином (1.0 U/ml) привело к увеличению уровня экспонированного актина в 4,4 раза по сравнению с неактивированными клетками. Результаты, полученные с помощью проточной цитометрии, были подтверждены в ходе непосредственной визуализации поверхностного антигена с использованием конфокальной лазерной сканирующей микроскопии. Время, в течение которого тромбоциты оказываются способными экспонировать актин, превышает период, соответствующий фазе секреции. Функциональное значение поверхностного актина тромбоцитов требует дальнейшего детального изучения, однако, предполагается, что актин, локализованный на плазматической мембране, может взаимодействовать с различными протеинами плазмы, выступая как сайтом связывания, так и/или центром их внеклеточного процессинга.
Модуляция мембранного потенциала митохондрий миометрия антагонистами кальмодулина
С. Г. Шлыков, Л. Г. Бабич, М. Е. Евтушенко, С. А. Карахим, С. А. Костерин
Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
e-mail: sshlykov@biochem.kiev.ua
Влияние антагонистов кальмодулина – кальмидазолиума и трифлуоперазина – на мембранный потенциал митохондрий исследовали с использованием метода проточной цитометрии, конфокальной микроскопии, применяя флуоресцентные зонды TMRM и MTG. Установлено, что антагонист кальмодулина кальмидазолиум в концентрациях от 1 до 10 мкМ дозозависимо снижает мембранный потенциал митохондрий. В то же время, трифлуоперазин в концентрации от 10 до 100 мкМ действует разнонаправленно – в концентрации 10 мкМ увеличивает поляризацию, тогда как в концентрации 100 мкМ вызывает практически полную деполяризацию митохондриальных мембран. Методом конфокальной микроскопии на клетках миометрия показано, что внесение в среду инкубации MTG приводит к появлению флуоресценции в «зеленом» диапазоне. Внесение второго зонда ТМRM приводит к появлению флуоресценции в «красном» диапазоне. Деполяризация митохондрий протонофором СССР и 10 мМ NaN3 сопровождается снижением интенсивности «красной» флуоресценции, при этом «зеленая» флуоресценция сохраняется. Внесение в среду инкубации 10 мкМ кальмидазолиума или 100 мкМ трифлуоперазина через 10–15 мин инкубации приводит к практически полному гашению флуоресценции зонда ТМRM. Таким образом, при использовании потенциалчувствительных флуоресцентных зондов TMRM и MTG продемонстрировано, что антагонисты кальмодулина модулируют мембранный потенциал митохондрий клеток миометрия.