Н. В. Короткевич, А. Ю. Лабынцев, К. Ю. Манойлов, О. И. Крынина,
Л. В. Дяченко, Д. В. Колибо, С. В. Комисаренко

Інститут биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
e-mail: gnr.nata@gmail.com

Исследование внутриклеточных путей транспортирования proHB-EGF, а также его лиганд-рецепторных комплексов, требует создания новейших подходов и моделей, в частности, с использованием флуоресцентных техник. С целью создания модели для исследования функций proHB-EGF было получено генетическую конструкцию pEGFP-N1-proHB-EGF, которая кодирует протеин proHB-EGF-EGFP–proHB-EGF, слитый с усиленным зеленым флуоресцентным протеином EGFP на цитоплазматическом конце молекулы. Путем трансфекции pEGFP-N1-proHB-EGF были получены эукариотические клетки линии Vero, экспрессирующие на поверхности протеин proHB-EGF-EGFP. Экспрессированный в клетках эукариот proHB-EGF-EGFP обладал способностью связывать нетоксичное флуоресцентное производное рецепторной субъединицы В дифтерийного токсина mCherry-SubB. После стимулирования трансфицированных клеток ТРА (12-0-тэтра-деканоилфорбол-13-ацетат), proHB-EGF-EGFP образовывал флуоресцентно-меченый С-терминальный фрагмент молекулы – CTF-EGFP. Таким образом, полученная генетическая конструкция pEGFP-N1-proHB-EGF позволяет визуализировать молекулы proHB-EGF и CTF в клетках. Это открывает новые возможности для исследования их функций, в частности, рецепторной функции proHB-EGF при связывании с молекулой дифтерийного токсина, исследований внутриклеточных путей транспортировки CTF и для поиска новых лигандов proHB-EGF.

Ключевые слова: В-субъединица дифтерийного токсина, гепаринсвязываю­щий EGF-подобный фактор роста (HB-EGF), дифтерийный токсин, С-терминальный фрагмент (CTF)