Tag Archives: апоптоз
Множественные молекулярные формы адаптерного протеина Ruk/CIN85 специфически ассоциированы с разными субклеточными компартментами в аденокарциномных клетках молочной железы человека MCF-7
Б. O. Виннитская-Мироновская1, Я. П. Бобак1, А. В. Пасечник2,
Н. И. Игуменцева1, А. A. Самойленко2, Л. Б. Дробот2
1Институт биологии клетки НАН Украины, Львов;
2Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
e-mail: drobot@biochem.kiev.ua
Ruk/CIN85 является проксимально расположенным по отношению к рецепторам «сигнальным» адаптером, в состав которого входят 3 SH3 домена, Pro- и Ser-богатые районы, а также C-концевой «coiled-coil» домен. Благодаря использованию различных доменов и мотивов Ruk/CIN85 функционирует в качестве преобразующей платформы в механизмах внутриклеточной сигнализации. На основе анализа кДНК были выявлены изоформы Ruk/CIN85 с различной комбинацией доменов, вовлеченных в протеиново-протеиновые взаимодействия. Показано существование дополнительных форм, которые являются продуктами посттрансляционных модификаций. Однако к настоящему времени в литературе отсутствует точная информация о субклеточном распределении множественных молекулярных форм Ruk/CIN85 и их роли в клеточных ответах. На модели аденокарциномных клеток молочной железы человека MCF-7, с применением ряда методических подходов для фракционирования клеток была показана специфическая ассоциация молекулярных форм Ruk/CIN85 с различными субклеточными компартментами. Индукция апоптоза клеток MCF 7 обработкой доксорубицином или культивированием в отсутствие сыворотки приводила как к системным изменениям внутриклеточной локализации молекулярных форм Ruk/CIN85, так и к изменениям их соотношения. Полученные данные позволяют по новому оценить потенциальную физиологическую значимость молекулярных форм Ruk/CIN85 в регуляции различных клеточных функций.
Проапоптические свойства суммарного препарата фитогемагглютинина и его отдельных изолектинов в культуре клеток человека 4BL
Т. А. Кочубей, О. В. Максимчук, Л. Л. Мацевич,
О. А. Пивень, Л. Л. Лукаш
Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев;
е-mail: kochubei2009@ukr.net
Фитогемагглютинин (ФГА) – известный лектин, обладающий митогенными свойствами. По последним экспериментальным данным, ФГА не только индуцирует деление клеток, но и обладает токсическим или цитостатическим действием. Однако молекулярные механизмы такого влияния остаются недостаточно изученными. Целью работы было исследовать проапоптические свойства суммарного препарата фитогемагглютинина и его отдельных изолектинов в культуре клеток человека неопухолевого происхождения 4BL. Используя метод специфической окраски люминесцентными красителями получены данные, указывающие на возможную смену частоты апоптических клеток в исследуемой культуре клеток под действием суммарного препарата фитогемагглютинина и его отдельного изолектина – эритроагглютинина. С использованием метода Вестерн-блот анализа выявлено, что под влиянием исследуемых лектинов происходит активация каспазы-3 и -8, а также индукция экспрессии проапоптозного протеина Вах, при этом наибольшее увеличение содержания активированных каспаз и протеина Вах вызывает действие эритроагглютинина. Эритроагглютинин по сравнению с лейкоагглютинином и суммарным препаратом фитогемагглютинина вызывает апоптоз с наибольшей эффективностью, при этом индукция апоптоза в культуре клеток человека неопухолевого происхождения 4BL происходит, вероятно, как путем активации каспазозависимого, так и митохондриального сигнальных путей.