А. Ю. Лабынцев, Д. В. Колибо, Е. С. Юрченко, А. А. Кабернюк,
Н. В. Короткевич, С. В. Комисаренко

Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
е-mail: lab.andrey@gmail.com

Субъединица В дифтерийного токсина (ДТ), которая состоит из двух доменов, R – рецепторного и Т – трансмембранного, играет важную роль в связывании токсина с рецептором на клетках-мишенях и в транспорте каталитической субъединицы А в цитозоль. Рекомбинантные аналоги субъединицы В являются перспективными представителями уникального класса транспортных протеинов, которые способны обеспечить доставку биологически активных молекул в цитозоль клеток. Создание таких конструкций требует определения роли каждого из фрагментов ДТ в транспортировании поглощенного комплекса рецептор–токсин.
В работе исследовали роль Т-домена во внутриклеточном транспорте рекомбинантных фрагментов ДТ. Для этого сравнивали особенности внутриклеточного транспортирования R-домена и субъединицы В, которая содержала как R-, так и Т-домен ДТ. Рекомбинантные фрагменты ДТ метили флуоресцентными протеинами, что позволило использовать в исследовании технику колокализации. Методом конфокальной микроскопии показаны отличия в транспортировании рекомбинантных производных ДТ в клетках линии Vero. Показано, что R-домен быстрее, чем субъединица В, попадает в тубулярные компартменты клетки. Анализ колокализации R-домена и субъединицы В подтверждает почти линейный ее рост согласно с коэффициен­том Пирсона (PCC) при увеличении времени инкубации. Однако процент субъединицы В, которая колокализирована с R-доменом, определенный по коэффициенту Мандерса (M1), рос нелинейно, что может свидетельствовать о способности субъединицы В попадать в определенные компартменты клетки, недоступные для R-домена. Роль Т-домена во внутриклеточном транспорте и компартментализации токсина, вероятно, связана с его способностью к формированию протонных каналов и взаимодействию с комплексом протеинов цитоплазмы COPI.

Ключевые слова: внутриклеточный транспорт, дифтерийный токсин, конфокальная микроскопия, Т-домен дифтерийного токсина, флуоресцентные протеины, эндоцитоз